پ.م.ك.510

Isolation an​d cloning of the cholesterol oxidase enzyme gene from Rodococcussp.isolated from soil for agricultural purposes

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي

مركز كرج

94

13/08/94

عالي

97ص.

اسمعيل لشگريان، حامد

توحيدي فر، مسعود

ص:92-97

پ استاد راهنما اسمعيل لشگريان، حامد , پ استاد مشاور توحيدي فر، مسعود

آنزيم كلسترول اكسيداز به¬عنوان نسل جديدي از آفت¬كش¬هاي بيولوژيك اثر آفت¬كشي قوي بر روي آفت كرم غوزه پنبه دارد. مكانيسم اثر كشندگي كلسترول اكسيداز مربوط به اكسيداسيون كلسترول در غشاي اپي تيليوم روده مياني حشرات است كه منجر به تخريب فيزيكي و ساختاري غشاء و درنتيجه ايجاد اختلالاتي در عملكرد غشاء و درنهايت باعث مرگ حشرات مي‌شود. به‌منظور توليد گياهان مهندسي ژنتيك شده با ژن كد كننده آنزيم كلسترول اكسيداز در جهت مقاوم‌سازي آن‌ها به آفات مستلزم انتخاب مناسب‌ترين سوش ازنظر ميزان بيان و فعاليت زياد اين آنزيم است، لذا اين مطالعه، باهدف كلونينگ ژن آنزيم كلسترول اكسيداز در باكتري اشرشياكلي در يك سيستم بياني pET مناسب جهت امكان هدايت پروتئين نوتركيب توليدشده به فضاي پري پلاسمي باكتري انجام شد. ‌سويه باكتري Rhodococcus sp 502 كه داراي فعاليت كلسترول اكسيدازي بالابود، جهت جداسازي ژن با PCR استفاده شد. محصول PCR ابتدا در پلاسميد خطي pJET و درنهايت در پلاسميد pET23a كلون و داخل ميزبان E.coli DH5α ترانسفورم شد. پس از همسانه سازي و استخراج پلاسميد نوتركيب pET23a + cho و به‌منظور تأييد حضور ژن از آنزيم‌هاي HindIII و XhoI و تعيين توالي استفاده‌شده است. آناليز تعيين توالي نشان داد كه توالي به‌دست‌آمده شباهت زيادي با كلسترول اكسيداز سويه‌هاي ديگر باكتري Rhodococcus موجود در NCBI دارد.

12/07/95

كشت كار، زهرا

35163