تهيه پروتئين نوتركيب آميلوپلولاناز Cob01133 از باكتري كوهنلا

با توجه به نياز گسترده‎ي صنايع غذايي به انواع شيرين كننده‎هاي حاصل از هيدروليز نشاسته همچون شربت‎هاي گلوكز، مالتوز و فروكتوز، استفاده از آنزيم‎هاي هيدروليز كننده‎ي نشاسته اهميت ويژه‎اي پيداكرده است. آنزيم آميلوپلولاناز (EC 3.2.1.41) يكي از اعضاي خانواده‎ي آلفاآميلازهاست كه، قادر به هيدروليز پيوندهاي α-(1→4) و α-(1→6) در نشاسته، پلولان و دكسترين مي‎باشد.‎ DNA ژنومي از باكتري كوهنلا استخراج شد. طراحي پرايمر از دو توالي از ژن‎هاي كد كننده‎ي آنزيم آميلوپلولاناز در اين باكتري با نام‎هاي Coh00831 به طول bp 1998 و Coh01133 به طول bp 3678 صورت گرفت. ژن Coh00831 ابتدا در ناقل كلونينگ pGEM-T همسانه‎سازي شد. سپس در ناقل بياني pET28a كلون، و در ميزبان بياني BL21 (DE3) با القاء (M 1/0) IPTG در °C 22 به مدت 6 ساعت بيان گرديد. ژن Coh01133 نيز پس از هضم آنزيمي با آنزيم‎هاي مهندسي شده در دو سر ژن، در ناقل بياني pET28a كلون و در ميزبان بياني BL21 (DE3) با القاء (M 1/0) IPTG در °C 25 به مدت 4 ساعت بيان شد. پس از خالص سازي و سنجش فعاليت آنزيم‎ها، مطالعات بيوانفورماتيكي به منظور بررسي خصوصيات بيوشيميايي و شناسايي دمين‎هاي كاتاليتيكي و غير كاتاليتيكي توالي‎ها نيز صورت گرفت.

05/07/95

كشت كار، زهرا

34791