پ.م.ك.400

Design an​d construction of cationic gold microparticles for nucleic acids delivery into plant cells

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي

مركز كرج

90

29/06/90

عالي

91ص.

موسوي، امير

ابراهيمي، محمدعلي

پ استاد راهنما موسوي، امير , پ استاد مشاور ابراهيمي، محمدعلي

هدف اين تحقيق ، ساخت ميكروذرات كاتيوني شده طلا و به كارگيري آنها جهت افزايش انتقال ژن به سلول هاي گياهي به روش زيست پرتابي است. سطح ميكروذرات طلا با اندازه 1 ميكرون در طي 2 مرحله كاتيوني شد. بدين منظور در مرحله اول، با ايجاد گروه هاي كربوكسيليك بر روي سطح ميكروذرات طلا از طريق تشكيل يك تك لايه ي خود آرا از ملكول 12 - مركاپتودودكانوئيك اسيد (MDDA) و در مرحله دوم، با ايجاد پيوند كووالانسي بين گروه هاي آميني ملكول هاي پلي اتيلن ايمين( PEI ) و گروه هاي كربوكسيل MDDA سطح ميكروذرات طلا با گروه هاي آميني ملكول هاي PEI داراي بار مثبت شد. گروه هاي آميني سطح ميكروذرات طلا داراي قابليت جذب الكتروستاتيك مولكول هاي DNA كه بار منفي قويي دارند، هستند. با استفاده از آناليز طيف سنج فوتوالكترون پرتو ايكس (XPS)، نشان داده شد ميزان نيتروژن اتمي كه نشانگر وجود گروه هاي آميني بر روي سطح هستند از صفر در صد بر روي سطح اصلاح نشده به حدود 7/8 درصد اتمي بر روي سطح كاتيوني شده مي رسد. اثر افزايش غلظت نمك در بافر بر ميزان جذب DNA بر روي ذرات كاتيوني شده نيز بررسي شد. نتايج نشان داد غلظت نمك باعث افزايش ميزان جذب DNA توسط ميكروذرات كاتيوني شده از 37/0 به Au particles DNA.g mg 87/0 مي شود. در ادامه به منظور ارزيابي عملكرد ميكروذرات كاتيوني شده طلا در انتقال ژن به سلولهاي گياهي، از سامانه ژن گزارشگر gus به منظور ارزيابي فعاليت ژن انتقال داده شده در كالوس هاي توتون تراريخته استفاده شد. شمارش تعداد نقطه هاي آبي حاصل از فعاليت ژن انتقال داده شده، نشان داد ميزان انتقال ژن توسط ميكروذرات كاتيوني به طور متوسط دو برابر بيشتر از آن توسط ميكروذرات اصلاح نشده است. افزودن نمك با غلظت 5/0 مولار باعث شد انتقال ژن به طور متوسط تا سه برابر ديگر افزايش يابد. استفاده از روش ارائه شده مي تواند گام مؤثري در افزايش كارايي بيان ژن هاي انتقال يافته و عملكرد گياهان تراريخت حاصله از طريق زيست پرتابي محسوب گردد.

28/06/95

كشت كار، زهرا

34501