پ.م.ك.367

partioal purification of Alpha Mannosidase from Soya plant an​d effect of inhibitor KCN, NaN3 an​d lons Co,Ni,Cu an​d Zn on enzyme activity in In vitro

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

مركز كرج

90

18/011/90

عالي

88ص.

آبرومند، محمد

نيك ضمير، عبدالرحيم

ص:81-88

پ استاد راهنما آبرومند، محمد , پ استاد مشاور نيك ضمير، عبدالرحيم

آلفا مانوزيدازها آنزيم هايي هستند كه در كاتابوليسم و دگرگوني زنجيره هاي قندي داراي مانوز بالا از اليگوساكاريدهاي موجود در گليكوپروتئين ها نقش بسيار مهمي را ايفا مي كنند. اين موضوع در موجودات مختلف و همچنين در صنعت داراي اهميت مي باشد. با توجه به اهميت آنزيم آلفا مانوزيداز، در اين پروژه اقدام به خالص سازي جزئي آن از سويا كرده و اثر مهاركنندگي KNC، NaN3 و يونهاي دو ظرفيتي كبالت، نيكل، مس و روي را بر فعاليت آن در شرايط In vitro بررسي و همچنين ويژگي ها و مشخصات سينتيكي آنزيم را تعيين نموديم. آنزيم آلفا مانوزيداز طي چندين مرحله و با استفاده از سانتريفيوژ نمودن پي در پي، رسوب با بوتانل، استن و سولفات آمونيوم (80 – 30%) با استفاده از سرم فيزيولوژي به طور جزيي خالص گرديد. سپس با استفاده از كيسه دياليز و بعد از آن ستون كروماتوگرافي با ژل سفادكس G – 100 مبادرت به استخراج هر چه بيشتر آن نموديم. در حين كار در دو مرحله متوالي از استخراج، ميزان پروتئين محاسبه گرديد كه نشان دهنده سير تزولي آن از مرحله اي به مرحله بعد بود. در ادامه فراكشن حاوي آنزيم را با استفاده از ژل پلي اكريل آميد، الكتروفورز نموديم و پس از رنگ آميزي ژل به دو روش كوماسي بلو و نيترات نقره با مشاهده باندها به يكي از اهداف اين پروژه ( خالص سازي جزيي آنزيم) دست يافتيم. سپس خصوصيات سينتيكي آنزيم و تأثير مهار كنندگي تركيبات شيميايي مورد نظر بر فعاليت آن مورد بررسي قرار گرفت. دماي مناسب آنزيم 50 درجه سانتيگراد، PH مناسب 2/5، فعاليت مخصوص u/mg 614/0 و Km آنزيم 50 بدست آمد. يون دو ظرفيتي مس بيشترين اثر مهار كنندگي را داشت كه با افزايش غلظت اثر مهاركنندگي آن افزايش يافت، در مقايسه يون دو ظرفيتي روي بيشترين اثر فعال كنندگي را داشت كه با افزايش غلظت اثر فعال كنندگي آن كاهش يافت.

24/06/95

كشت كار، زهرا

34393