پ.م.ك.356

Cloning an​d sequencing of M2 gene of influenza A virus H9N2 strains an​d transfer it into expression vector PEGFP-N1

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي كشاورزي

مركز كرج

89

27/06/89

عالي

187ص.

ميرجليلي، علي

بخشي خانيكي، غلامرضا

ص:177-187

پ استاد راهنما ميرجليلي، علي , پ استاد مشاور بخشي خانيكي، غلامرضا

بارزترين نقش پروتئين M2 در ويروس A آنفولانزا ايجاد يك كانال يوني يكطرفه براي عبور H به درون ويروس مي باشد. اين قابليت در اسيدي شدن محتويات ويروس و رها سازي ژنوم آن به درون سيتوپلاسم ميزبان نقش داشته و امري حياتي براي تكثير ويروس به شمار مي رود. بر اساس شواهد، انسداد اين كانال از تأثير ويروس بر سلول ميزبان جلوگيري كرده و مانع بيماريزايي آن مي شود. با توجه به اهميت اين پروتئين كانالي در ارائه راه كارهاي جديد براي مقابله با انواع ويروسهاي A آنفولانزا كه بسياري از جمعيتهاي حيواني و انساني را تهديد مي كنند، اين تحقيق سعي دارد تا با توالي يابي ژن مسئول سنتز اين پروتئين چشم اندازروشني را براي توليد آنتي بادي ها و داروهاي جديد محدود كننده اين ويروس ايجاد كند. در اين تحقيق سعي شده است تا ميزان بالاي حفظ توالي (Sequence Conservation) ژني، از طريق مقايسه توالي ژن M2اي كه از يك ويروس A آنفولانزا با نام علمي A/chicken/Iran/101/1998(H9N2) استخراج شده است با ديگر توالي هايي از اين ژن كه در تحت تيپهاي متداول اين ويروس در سطح جهان وجود دارند، نشان داده شود. همين امر نقش آنتي ژني اين پروتئين را نسبت به ديگر آنتي ژنهاي معروف اين ويروس كه هر ساله دچار تغيير مي شوند و نسبت به داروهاي مهار كننده مقاومت نشان مي دهند، دو چندان مي كند. كلون اين ژن به كمك وكتور متعارف PQZ57RT كه نوعي TA وكتور بي نياز از آنزيم برشي است،در سويه DH5α از باكتري اي كولي انجام پذيرفت. اين روش چنانچه باكتريهاي كلون شده در شرايط انجماد استاندارد قرار بگيرند امكان نگهداري نامحدود كلونيها را فراهم مي كند و از طرفي تكثير مجدد باكتريها و استخراج ژن از آنها را به سادگي امكان پذير مي سازد. در انتها نيز با انتقال اين ژن به يك وكتور ديگر بنام PEGFP-N1 كه نوعي وكتور بياني است و قادر به ترجمه ژن در سلولهاي پستانداران مي باشد، مقدمات لازم براي توليد پروتئين اين ژن ايجاد گرديد.

24/06/95

كشت كار، زهرا

34324